科学研究从选题、确定课题时已经开始。这里指的研究，是指选题确定之后集中攻关的 研究。医学论文发表具体来说，有以下内容：１、搜集资料。凡是与课题有关的资料都应昼搜集齐全。２、 整理资料。使散乱的资料条理化，具有可用性。３、调查材料。材料是科研的基础，除了查 阅资料搜集材料外，有时还要进行调查。调查分为实地调查和书信调查两种，实地调查可用 开会、查勘、个别访问等方法进行。在调查中要注意搜集原始材料，有时要绘图，或者摄影， 或者录音，或者翻印。４、观察实验。这主要是自然科学使用的研究方法，社会科学中的某 些学科也要用到。通过观察、实验，论文发表我们可以取得重要的数据和材料，经过分析、综合，使 感性认识上升到理性认识，从而检验和发展科学理论。５、思维创造。这是研究中的最富有 创造性的阶段。它是由一系列既相互区别又密切联系着的方法所组成的，其中主要有：归纳 和演绎，分析和综合，从具体到抽象，再从抽象到高级的理性认识。这种科学的逻辑思维方法就是辩证逻辑。
百合性微苦寒，入心肺经，养阴润肺，清心安神；同时个大肉肥，营养丰富，具有芳香微苦的特点，是一种高级的滋补食品，又是一味重要的中药材。因此本文主要对湖州百合药用成分的提取和纯化方面进行研究，并与兰州百合多糖含量进行比较，为此后相关方面的研究作一参考，同时也为药食两用型天然产物研究积累一定的研究资料。
1．实验仪器及试剂
SP-572型紫外可见分光光度计；RE-52A旋转蒸发仪；DK-S24数显恒温水浴锅；药用百合饮片（浙江湖州）；食用百合（兰州昌隆百合加工厂）；D-无水葡萄糖（110833-200503，中国药品生物制品检定所）
2. 实验前处理
2.1 0. 1 mg/mL葡萄糖标准溶液的配制
精密称取恒重的葡萄糖标准品0.0025g（置五氧化二磷减压干燥器中干燥12小时以上）加水溶解定容至25ml容量瓶中即得。
2.2 葡萄糖标准曲线的绘制
苯酚-硫酸比色法：移取0. 1 mg/mL的葡萄糖标准液1.0mL，2.0mL，3.0mL，4.0mL，5.0mL，6.0mL分别置10mL容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，分别再移取1.0 mL置刻度试管内，加5%苯酚溶液1mL，浓硫酸5mL，室温放置40min, 按上述混合液操作做空白溶液。于490nm处测定吸收度(A)，得回归方程为：y=10.7700x-0.0074，R=0.9990
3. 湖州百合多糖提取方法的研究
3.1 湖州百合提取液的除蛋白工艺研究【1】
天然植物中多糖与蛋白质两种高分子成分共同存在。且二者常形成糖蛋白复合物，给百合多糖的测定带来很大困难，所以在测定前必须进行除蛋白处理。目前除蛋白方法以Sevag法最为常用，即采用氯仿、正丁醇处理多糖水溶液，使蛋白质成分变性沉淀，本文通过正交实验对Sevag法进行了优化，最佳除蛋白纯化工艺为：氯仿-正丁醇体积比为2∶1、样品—(氯仿+正丁醇)体积比为5∶2、振摇时间30 min。
3.2 百合沸水回流提取及其工艺条件的优选【2-3】
每组称取百合粗粉（过10目筛）10.0g，按正交设计表条件进行提取，多糖提取液药液浓缩至原药液体积的1/3，加4倍量95%乙醇沉淀，静置过夜，抽滤得白色粗多糖，将粗多糖提取液用最佳Sevag法纯化，沉淀用无水乙醇、丙酮、无水乙醚依次洗涤，真空干燥，测定纯化后多糖得率。
表3-1 正交因素与水平
因 素 A B C D
水 平 温度(℃) 固液比 提取次数 时间(h)
1 60 1:6 1 1
2 80 1:8 2 2
3 95 1:10 3 3
表3-2 L9（34）正交表及实验结果
实验号 A温度(℃) B固液比 C 提取次数 D时间(h) 多糖提取率(%)
1 1 1 1 1 0.151
2 2 2 2 2 1.40
3 1 3 3 3 2.45
4 2 1 2 3 2.465
5 2 2 3 1 0.68
6 2 3 1 2 0.854
7 3 1 3 2 0.965
8 3 2 1 3 1.525
9 3 3 2 1 0.35
均值1 1.334 1.194 0.843 0.394
均值2 1.333 1.202 1.405 1.073
均值3 0.947 1.218 1.365 2.147
极差 0.387 0.024 0.562 1.753
表3-3 方差分析表
因 素 偏差平方和 自由度 F比 F临界值 显著性
温度 0.299 2 299.000 19.000 *
固液比 0.001 2 1.000 19.000
时间 0.589 2 589.000 19.000 *
次数 4.687 2 4687.000 19.000 *
误差 0.00 2
由方差分析可知：提取温度升高，提取次数增加都有利于百合多糖的浸出速度加快，浸出量增加，但如温度高于80℃，多糖得率的增加量已很小，且蛋白质易溶出，增加了去蛋白的难度和工作量，所以浸提温度不宜过高，低温浸提虽对多糖活性影响较小，但得率太低。综合考虑提取率、多糖活性等各种因素，提取温度选择80℃为最佳。考虑百合多糖的含量和工业中的实际生产情况，最终确定的最佳提取条件为：A2B1C2D3，即用8倍于药材量的蒸馏水，在80℃回流提取2次，每次3 h。
4． 兰州食用百合与湖州药用百合的多糖提取及含量测定
准确称取兰州食用百合粗粉和湖州药用百合粗粉（过10目筛）各10.0 g，按百合多糖沸水提取的最佳工艺操作并测定多糖得率.
表4-1 兰州食用百合和湖州药用百合多糖含量的比较
兰州食用百合 湖州药用百合
百合多糖提取率 (%) 9.84 2.44
由上表可以看出，食用百合中多糖的含量大于药用百合中多糖的含量。所以，食用百合作为一种高级美味的滋补食品受到广大人们的青睐，而药用百合则以其独特的药理作用用于滋补和治疗疾病。
5. 讨论
百合是我国卫生部审批通过的首批药食两用植物，其开发前景广阔，但药用百合和食用百合之间的成分含量相差较悬殊，该文仅对多糖含量一项进行了含量测定，对其他成分如百合总皂苷的含量测定比较仍需实验研究。
参考文献：
[1] 刘成梅，万茵，涂宗财，等.百合多糖除蛋白方法的研究[J].食品科学，2002,23(1):89-90.
[2] 杨林莎,李玉贤,李秋杰,等.百合多糖提取、纯化工艺优选[J].中医研究,2005,18(1):25-27.
[3] 赵小亮,孟鑫,吴建,等.兰州百合多糖提取研究[J].中华实用中西医杂志,2004,4(17):2515-2516.
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